Diabetologia：激活但机能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现肾脏自身抗微到浮现1改型冠心病流行病学病症的重大突破不下在儿童时期就有很差的说明了，多个肾脏自身抗微中所性的儿童中所有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的儿童这一数目减低到84%。正因如此之下，占到流行病学1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的确诊机制还没有得到适当的研究工作。

越来越多的人开始常用已确定系统来判别1改型冠心病的重大突破：个微在浮现多种肾脏自身抗微时离开第1阶段，浮现血糖异常时离开第2阶段，浮现病症时离开第3阶段。一些多发肾脏自身抗微中所性的个微，在1期和2期，重大突破极快，并发展为确诊的1改型冠心病。我们之后说明了了一一组在首次测定到多种肾脏自身抗微样本后至少10年无冠心病的极慢重大突破者，这一组病症人数少，但外观上非常明确。随后，我们发现肾脏自身细胞质特异性CD8+T细胞内底物在重大突破减慢的病症中所基本不存在，但在更进一步确诊和长期存在的冠心病病症中所很容易测定到。这或许表明，与重大突破病症正因如此，这些病症自身免疫底物的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但冠心病病症存在一些功能缺陷，其中所包括对IL-2的底物控制能力减少。此外，冠心病病症中所的震荡CD4+T细胞内或许对调节更具抵抗性，显出为震荡T细胞内的减缓减弱，自然现象产生的Treg和微外产生的可借Treg，以及细胞质经历的CD4+T细胞内中所IL-2底物减弱。本研究工作的意在是说明了了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极减慢重大突破者中所的外观上，他们的平均比不下为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群基础上的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病症配偶中所检查1改型冠心病的险恶因素。我们之后说明了了长期减慢重大突破者的外观上，他们保持多重肾脏自身抗微中所性超过10年，但没有浮现冠心病的流行病学病症，慢性或非顺利变性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意获取大量血液样本的减慢重大突破者纳入T和B细胞内功能研究工作。在迄今的研究工作中所，8名慢重大突破者(SP一组)，中所位比不下43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身抗微中所性。所有的旁观者都处于1改型冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗微对某些细胞质的中所性底物，然而，一名病症已经处于2期至少6年，但没有浮现流行病学病症，一名病症被诊断为冠心病，该病患72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据研究工作中所对该NAD顺利进行了单独评估。裂解外周血单个核细胞内(PBMCs)，采行多参数流式细胞内术和T细胞内减缓飞行测试评估NAD中所Treg的频不下、显出改型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类研究工作，评估Treg显出改型。

结果：与健康NAD正因如此，来自慢重大突破微的遗忘CD4+T细胞内的监督聚类看出，激光阴的遗忘CD4+ Treg频不下减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关细胞(GITR)强调减低有关。一名HbA1c下降时的病症与重大突破减慢者和比如说的对照一组正因如此，Treg磬有所并不相同。功能研究工作表明，与健康NAD正因如此，来自减慢重大突破微的Treg介导的CD4+震荡T细胞内减缓显著受损。显出为对震荡CD4+T细胞内CD25和CD134强调的减缓减低。

示意图1 深入的显出改型研究工作看出，CD4+Treg亚改型在慢重大突破路由表中所减低。由FlowSOM聚合的Treg室，有数在来自所有NAD的光阴CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物强调鉴定出10个元簇:遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)常用9个并不相同Treg标示聚合的10个元簇的MST。每个节点代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在节点一组周边装裱。每个节点中所的饼示意图坚称单个标示的强调级别。(b)每个元聚类的热示意图，以看出全面性标示强调。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)聚合示意图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的沙质。(e-l)相比之下原子量为每个metacluster箱线或示意图(原子量> 0.05%)相符为HD和SP一组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞内(l)。橘色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检查。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模改型得出得出结论，Treg频不下的减低是重大突破减慢的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘研究工作(g-k)比较SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行裂解，各种类型FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)一组以及NADSP 606(橘色)中所CD25+ cd127的频不下摘要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯姪集的箱线或示意图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头显眼的簇被鉴别为SP和HD路由表之间的并不相同。(j)箱线或示意图看出了在SP(黑纹)和HD(灰点)一组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比之下原子量(数目)。(k)加权看出每个簇的显出改型(白色)和Treg标示相比之下强调与背景强调(白色);上列，线或程Treg_3;请注意一行，线或程Treg_4。背景与所有其他簇中所标示的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检查

示意图3 与健康献血者正因如此，重大突破减慢者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T细胞内元簇(遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个强调标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的强调热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR强调联接，看出加权(c)和摘要示意图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检查，p< 0.07(橘色)所有NAD包括，p< 0.05(白色)NADSP 606和比如说的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR强调，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)联接，看出加权(e)和摘要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检查

示意图4 来自减慢重大突破的CD4+ treg细胞内控制震荡CD4+T细胞内的控制能力减少。SP一组用白色的线或和橘色坚称，HD一组用黑色的线或和橘色坚称，橘色的线或/橘色坚称NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示为CFSE, Treg按观察的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞内，指导3天后顺利进行流式细胞内术测定。(a-d)与CD4+需要的话者相比之下应的treg指导(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE减缓比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比例。常用中所性对照(激光阴的响应细胞内不含treg)计数减缓比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 震荡CD4+T细胞内对减慢重大突破的T细胞内光阴化的减缓更敏感。SP一组用白色的线或和橘色坚称，HD一组用黑色的线或和橘色坚称，橘色的线或/橘色坚称NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示，treg按观察的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞内，指导3天后顺利进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因姪研究工作。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE减缓三份(b)。(c,d) CD25减缓三份(c)和CD134减缓三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自减慢重大突破姪的光阴化遗忘CD4+Treg在GITR强调中所得到了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1改型冠心病风险个微中所的异质性的不足之处。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28